紫外可見(jiàn)分光光度計的校準主要是通過(guò)對一些有數值型的技術(shù)指標測試來(lái)進(jìn)行。如波長(cháng)準確度、波長(cháng)重復性、光譜帶寬、雜散光、分辨率、透射比誤差、透射比重復性、噪聲、基線(xiàn)平直性等,這里主要介紹波長(cháng)準確度和波長(cháng)重復佳、透射比準確度和透射比重復性?xún)蓚€(gè)項目校準的具體儀器條件或校準步驟。
?、俨ㄩL(cháng)準確度和波長(cháng)重復性 若儀器能夠放置低壓汞燈的,按照檢定規程低壓汞燈進(jìn)行全波長(cháng)測試,否則可用儀器固有的氘灼測試,取單束光能量方式,掃描速度15nm/min,響應快,小帶寬0.1nm,量程0~100%,對486. 02nm和656. 10nm兩個(gè)單峰進(jìn)行單方向重復掃描3次,測量出譜圖上的2條譜線(xiàn)波長(cháng),波長(cháng)測量的平均值與波長(cháng)的標準值之差就是波長(cháng)準確度,測量波長(cháng)的大值與小值之差就是波長(cháng)重復性。
?、谕干浔葴蚀_度和透射比重復性 取帶寬2nm,用1套標準石英吸收池分別裝空白溶液和質(zhì)量分數為0.006000%的重鉻酸鉀標準溶液,在35nm,257nm,313nm,350nm四個(gè)波長(cháng)處連續3次測量透射比,與檢定規程中附帶的標準值進(jìn)行比較,測量平均值與標準值之差就是透射比準確度,測量值的大值與小值之差就是透射比重復性。
影響紫外可見(jiàn)分光光度計光度準確度的主要因素有以下幾個(gè)方面:
?、賰x器的雜散光。
?、趦x器的光度噪聲。
?、蹆x器的基線(xiàn)平直度。
?、軆x器的光譜帶寬。不同的光譜帶寬分析誤差不同;不同試樣有不同的*分析測試光譜帶寬。
?、莶ㄩL(cháng)準確度。對同一物質(zhì),不同的波長(cháng)有不同的摩爾吸光系數,即不同的靈敏度。
?、拊嚇拥膩?lái)源,包括樣品的制備和取樣的方法(如稱(chēng)量、容量、溶劑、試劑、pH值、時(shí)間、溫度等)。
?、弑壬蟮男阅?,包括比色皿的加工誤差、比色皿的配對、比色皿的玷污等。
由此可知,光度準確度是一個(gè)綜合性的性能技術(shù)指標。要使用紫外可見(jiàn)分光光度計測得準確可靠的數據,必須注意上述幾個(gè)方面的影響。特別是在分析測試時(shí),如何選擇(或設定)這些技術(shù)指標是非常重要的。應該指出的是,紫外可見(jiàn)分光光度計在同時(shí)給出吸光度誤差和透射比誤差時(shí),兩者不能相互矛盾。
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